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    配制臺式高速離心機密度梯度溶液的方法

    發布時間:2017-07-03      點擊次數:2148

      前兩天小編給大家講解了臺式高速離心機密度梯度離心法和梯度介質的回收,為了讓大家對此問題認識更全面,今天給大家科普下密度梯度溶液的配制方法。配置密度梯度溶液,一般情況下是先配制高濃度儲備液,再用緩沖液稀釋到需要的濃度,階梯梯度配制若干個不同密度的溶液,連續梯度一般配制兩種密度的溶液,其中一種是梯度的大密度,另一種是梯度的小密度。

      用各種離心機轉子在梯度介質中分離顆粒時,使用兩種形式的梯度,即自形成梯度和預形成梯度。自形成梯度是梯度介質在離心場作用下顆粒重新分布,形成從頂部到底部逐漸增加密度的液柱。預形成梯度是指在離心之前,用梯度形成儀或人工的方法預先制備密度梯度柱。按照梯度結構可分為不連續梯度(即階梯度)和連續梯度兩種類型。連續梯度又有線性梯度、指數梯度、對數梯度和復合梯度。有時為了速率區帶離心分離的方便,又設計了等動力梯度,為了防止在區帶轉子中的徑向稀釋,設計了等體積梯度。配置密度梯度溶液需要注意很多事項。

      堿金屬鹽溶液在4℃下可以長期保存,但含碘的物質應避光保存,多元醇易受微生物污染,保存在-20℃使用時不方便。好臨時配置。有些使用冷凍離心機進行離心需要在無菌條件下進行,但高壓消毒對有些梯度介質會帶來一些不利影響,如引起Percoll顆粒不穩定,配制時可只對稀釋劑進行消毒,碘化梯度介質中只有Metrizamide可以進行高壓消毒。溶解多糖是先給粉劑里加入少許水攪拌,使之成為半透明的糊狀,再稀釋到所需體積。如果直接把大量水或緩沖液加到多糖粉劑里,會形成大量凝塊。可用比重瓶或折射儀測定梯度溶液的密度和所有介質的密度分布,用下述方程能快速地根據折射率計算溶液的密度:

    ρ=An-B 
    式中,A和B的值隨著梯度介質和溫度的變化而不同,如用0.8% NaCl、120mmol/L Tricine-NaOH配制的等滲Iodixanol梯度中,A=3.2984,B=3.3967。

    儲存液與稀釋劑間通過混合得到的溶液密度可用下式計算:

    圖片1.png

    式中,D為所需密度;V為儲存液的體積;d為儲存液的密度;V1為稀釋液的體積;d1為稀釋液的密度。
      經過小編的講解,大家是否清楚了蜀科
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